眾所周知,抗生素作為促生長(zhǎng)型添加劑被廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)的大幕被逐步拉下,抗生素對(duì)人類(lèi)構(gòu)成嚴(yán)重潛在威脅的負(fù)面作用——藥物殘留、二重感染、耐藥菌株的產(chǎn)生、正常微生態(tài)環(huán)境平衡的破壞、畜禽免疫力的降低,及畜禽產(chǎn)品中藥物殘留可能導(dǎo)致人類(lèi)DNA結(jié)構(gòu)的改變,從而造成“致殘”、“致畸”、“致癌”等嚴(yán)重后果的現(xiàn)象,已經(jīng)日益凸顯。因此,越來(lái)越多的國(guó)家和地區(qū)已經(jīng)制定出臺(tái)了相應(yīng)的政策和法規(guī)對(duì)養(yǎng)殖業(yè)中抗生素的使用加以限制和規(guī)范。從而,拉開(kāi)抗生素替代品研發(fā)的序幕就顯得尤為迫切。
隨著對(duì)畜禽胃腸道正常微生物的組成、定植規(guī)律及其與宿主關(guān)系研究的日益深入,通過(guò)調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道微生物區(qū)系來(lái)改善動(dòng)物的健康狀態(tài),增強(qiáng)機(jī)體潛在的抗病力已經(jīng)成為了動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)領(lǐng)域探討的熱點(diǎn)。其中,寡糖被作為一種理想的抗生素替代品的研究受到了高度的重視。寡糖(Oligosaccharides),又名:低聚糖、非消化性寡糖、化學(xué)益生素,是由2~10個(gè)單糖通過(guò)糖苷鍵連接形成直鏈或支鏈的一類(lèi)糖,介于單體單糖與高度聚合的多糖之間。根據(jù)單糖分子種類(lèi)、分子間結(jié)合位置和結(jié)合類(lèi)型的不同,寡糖種類(lèi)可達(dá)數(shù)千種以上。功能性寡糖主要是不能被人和其它單胃動(dòng)物自身分泌的酶和腸道有害菌分解利用,但能被腸道有益微生物利用的特殊糖類(lèi),如已研制出的產(chǎn)品有:殼寡糖、甘露寡糖、果寡糖、半乳甘露寡糖、異麥芽寡糖、寡乳糖、寡木糖、β-寡葡萄糖、低聚焦糖、反式半乳寡糖、大豆寡糖等,研究應(yīng)用較多的是前三種寡糖。
(一)寡糖的類(lèi)別、結(jié)構(gòu)及其來(lái)源
1.殼寡糖(Chitooligosaccharide,COS)
殼寡糖(也稱(chēng)幾丁寡糖,學(xué)名β-1,4-寡糖-葡萄糖胺)是指聚合度在2-20范圍的氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖聚合物,如殼二糖、殼三糖、殼四糖、殼五糖、殼六糖等。殼寡糖是殼聚糖降解的低分子量產(chǎn)物,其水溶性大大增加,與殼聚糖相比,殼寡糖更易被生物體吸收而表現(xiàn)出更優(yōu)越的生理活性,在抑菌、抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)血脂和血糖、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫及活化腸道菌群中具有廣泛的應(yīng)用。目前,殼寡糖來(lái)源于殼聚糖的降解,主要有酸解法、氧化降解法和酶解法。殼聚糖是甲殼素的N-脫乙?;a(chǎn)物(脫乙酰度大于55%),其單糖結(jié)構(gòu)單元主要為2-氨基-2-脫氧-D-葡萄糖和少量的N-乙酰氨基葡萄糖。目前,殼聚糖已被廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域:(1)在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域,可作為糧食和蔬菜作物種子的處理劑,激發(fā)種子提前發(fā)芽,提高作物產(chǎn)量;(2)在食品領(lǐng)域,對(duì)多種蔬菜和水果具有明顯的保鮮、防腐作用;(3)在醫(yī)藥領(lǐng)域,具有降血脂、提高機(jī)體免疫力、促進(jìn)傷口愈合等多種功效;(4)在水凈化處理應(yīng)用領(lǐng)域,可用做重金屬螯合劑和絮凝劑來(lái)凈化自來(lái)水或處理重金屬工業(yè)廢水。
2.甘露寡糖(Mannoseoligosaccharides,MOS)
最初發(fā)現(xiàn)MOS是在魔芋粉的硫酸水解液中。甘露寡糖是甘露糖之間或甘露糖與葡萄糖之間通過(guò)ɑ-1,2、ɑ-1,3、ɑ-1,6或β-1,3、β-1,4糖苷鍵連接而成的一種低聚糖,主要來(lái)源于魔芋精粉、甜菁膠和微生物細(xì)胞壁。目前,人用保健品甘露寡糖主要來(lái)源于魔芋,其純度在 35%~55%;動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)領(lǐng)域應(yīng)用的甘露寡糖添加劑,主要是從廢棄的啤酒酵母細(xì)胞壁中提取。酵母細(xì)胞壁質(zhì)地堅(jiān)硬,其重量占酵母細(xì)胞干重的18%~25%,厚度為0.1~0.3μm,可分為3層,外層主要組分為甘露聚糖,約占酵母細(xì)胞壁干重的30%,由約50個(gè)甘露糖通過(guò)ɑ-1,6糖苷鍵相結(jié)合組成;中間層主要組分為蛋白質(zhì)和幾丁質(zhì);內(nèi)層主要組分為β-葡聚糖,約占酵母細(xì)胞壁干重29%~64%,由10~20個(gè)單糖通過(guò)β-1,3/1,6糖苷鍵相結(jié)合組成,呈螺旋形的立體分子結(jié)構(gòu),能對(duì)免疫系統(tǒng)引起刺激作用,在動(dòng)物體內(nèi),不可溶、不可吸收、不產(chǎn)生黏性、耐酸、耐高溫。
3.果寡糖(Fructooligosaccharide,FOS)
果寡糖,又名低聚果糖,是蔗糖分子和D-果糖分子以β-1,2糖苷鍵相結(jié)合所形成的一組寡聚糖的總稱(chēng),結(jié)構(gòu)式表示為G-F-Fn(G為葡萄糖,F為果糖,n=1~3)。根據(jù)蔗糖分子連接1個(gè)D-果糖、2個(gè)D-果糖、3個(gè)D-果糖形成的寡糖分別稱(chēng)為果寡三糖(GF2)、果寡四糖(GF3)、果寡五糖(GF4)。果寡糖廣泛存在于大麥、小麥、黑麥、洋蔥、大蒜、馬鈴薯、菊芋等植物中。
(二)寡糖在機(jī)體內(nèi)的作用機(jī)理
1.寡糖對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)作用
哺乳動(dòng)物對(duì)碳水化合物的消化僅限于ɑ-1,4糖苷鍵,因此,由ɑ-1,2、ɑ-1,3、ɑ-1,6或β-1,3、β-1,4糖苷鍵連接的低聚糖能抵抗動(dòng)物機(jī)體消化酶的降解,直接進(jìn)入小腸后端和大腸,被雙歧桿菌、乳酸桿菌等有益微生物作為營(yíng)養(yǎng)基質(zhì),最終被降解為短鏈脂肪酸、乳酸和二氧化碳等。體外試驗(yàn)也均證實(shí)以FOS為唯一碳源時(shí),沙門(mén)氏菌不能生長(zhǎng)。
病原菌必須通過(guò)表面的外源凝集素與動(dòng)物腸粘膜表面的D-甘露糖受體結(jié)合后才能在消化道定植。MOS正是通過(guò)結(jié)合位點(diǎn)的方式發(fā)揮抑菌作用。一方面,MOS能競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合腸上皮細(xì)胞的特異位點(diǎn),通過(guò)占位方式從而抑制病原菌與腸粘膜的結(jié)合,另一方面,MOS含有D-甘露糖的相似受體,可以結(jié)合病原菌,從而阻止病原菌吸附到腸表面上,甚至使已結(jié)合到上皮細(xì)胞的大腸桿菌脫落下來(lái),讓病原菌隨著糞便一起排出體外。
朱玉霞(2013)對(duì)殼寡糖的抑菌活性研究表明:在相同pH條件下,殼寡糖的脫乙酰度越高,對(duì)大腸桿菌抑制效果越好;在相同脫乙酰度的殼寡糖條件下,pH越低,其對(duì)大腸桿菌抑制效果越好。不同殼寡糖單體對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和尖孢鐮刀菌的抑菌活性差別也較大,具體表現(xiàn)為:殼六糖最高(對(duì)鐮刀菌抑制率為70.5%)、殼二糖最低(對(duì)鐮刀菌抑制率為38.8%),氨基葡萄糖沒(méi)有表現(xiàn)出抑菌活性。
2.寡糖對(duì)機(jī)體免疫防疫功能的調(diào)節(jié)作用
特異性免疫系統(tǒng)和非特異性免疫系統(tǒng)共同組成動(dòng)物的免疫防御體系,其中,非特異性免疫是阻止病原菌侵入機(jī)體的第一道防線(xiàn)。FOS和MOS可以調(diào)節(jié)機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫功能。體外試驗(yàn)表明,MOS可以使血清中IgG和IgA濃度升高,提高B淋巴細(xì)胞數(shù)和白細(xì)胞介素2、γ-干擾素水平。FOS能顯著提高T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能和NK細(xì)胞的殺傷力,提高新城疫抗體水平。概括來(lái)說(shuō),寡糖能在多條途徑,多個(gè)層面對(duì)免疫系統(tǒng)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用,不僅能激活各類(lèi)型的免疫細(xì)胞,還能活化補(bǔ)體,促進(jìn)細(xì)胞因子的生成,增強(qiáng)紅細(xì)胞免疫功能,同時(shí),寡糖還能提高疫苗的保護(hù)力。
(三)寡糖在動(dòng)物飼料中的應(yīng)用研究
1.寡糖在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用研究
劉含亮等(2012)研究殼寡糖對(duì)虹鱒生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)及非特異性免疫功能的影響,結(jié)果表明:200mg/kg殼寡糖不僅可顯著提高特定生長(zhǎng)率和增重率,顯著降低飼料系數(shù),而且極顯著提高白細(xì)胞吞噬百分率、吞噬指數(shù)、血清殺菌百分率和溶菌酶活性。譚崇桂等(2013)研究MOS對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)及血清非特異性免疫的影響,結(jié)果表明:0.4%MOS可顯著提高對(duì)蝦增重率12.78%,顯著降低飼料系數(shù)0.09%;顯著提高溶菌酶、堿性磷酸酶活力、超氧化物歧化酶活力,以及胃蛋白酶和肝胰臟脂肪酶活性。以上研究表明,寡糖對(duì)魚(yú)蝦的促生長(zhǎng)作用,與其改善機(jī)體的免疫力和抗氧化能力有密切關(guān)系。
2.寡糖在豬飼料中的應(yīng)用研究
黃俊文等(2005)研究表明:甘露寡糖與納豆芽孢桿菌低劑量合用對(duì)改善斷奶仔豬生產(chǎn)性能,降低腹瀉率具有較好的協(xié)同作用,對(duì)仔豬的免疫和抗氧化機(jī)能有改善作用,體現(xiàn)在血清中CD3+,CD4+水平顯著提高,MDA含量顯著降低,GSH-Px活性顯著增加。岳文斌等(2006)研究果寡糖和甘露寡糖對(duì)斷奶仔豬免疫機(jī)能的影響,結(jié)果表明:寡糖組的仔豬免疫器官指數(shù)較金霉素和洛克沙生聯(lián)用組(ABT組)大;與ABT組相比,寡糖組顯著提高了IgA、IgG、IgM濃度。臧建軍(2003)研究果寡糖和甘露寡糖對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能影響,結(jié)果表明:FOS和MOS較抗生素可顯著減少斷奶仔豬腹瀉發(fā)生率,增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力,維持血漿滲透壓和脂類(lèi)物質(zhì)正常水平;與抗生素相比,FOS和MOS降低血清甘油三酯水平,且以FOS的低脂效應(yīng)較顯著;與抗生素相比,FOS和MOS通過(guò)促進(jìn)CD4+,CD8+,T淋巴細(xì)胞的分化、刺激斷奶仔豬免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育、提高血清免疫球蛋白A、G、M水平,最終增強(qiáng)了由T、B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫和體液免疫功能。
3.寡糖在禽飼料中的應(yīng)用研究
溫若竹等(2011)利用PCR-DGGE技術(shù)探討甘露寡糖對(duì)肉仔雞腸道菌群穩(wěn)定性及多樣性的影響,結(jié)果表明:MOS促進(jìn)了腸道乳酸桿菌等有益菌的生長(zhǎng),同時(shí)抑制梭菌屬等有害菌的生長(zhǎng)。閻桂玲等(2008)研究啤酒酵母源甘露寡糖對(duì)肉仔雞腸道微生物及免疫機(jī)能的影響,結(jié)果表明:酵母源甘露寡糖顯著地減少了盲腸內(nèi)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的數(shù)量,顯著地促進(jìn)雙歧桿菌的生長(zhǎng);顯著提高了新城疫一免和二免后14d的抗體效價(jià)水平;顯著提高了淋巴細(xì)胞對(duì)ConA的反應(yīng)性及巨噬細(xì)胞的吞噬力;0.15%添加量對(duì)抑制腸道致病菌生長(zhǎng)的效果最好,而0.1%添加量則更有利于提高免疫機(jī)能。胡彩虹等(2003)研究表明:在艾維因商品代肉仔雞日糧中添加果寡糖(添加量為0.4%~0.8%),不僅能顯著提高日增重、顯著降低料重比,而且顯著降低胸肌和肝臟的膽固醇水平,顯著提高盲腸中乙酸、丙酸、丁酸和血漿中乙酸含量,顯著增加盲腸中雙歧桿菌和乳酸桿菌含量,顯著降低大腸桿菌含量,顯著提高糞便中膽汁酸和膽固醇含量。綜合以上研究表明:寡糖對(duì)肉仔雞的促生長(zhǎng)作用,與其抑制有害菌的生長(zhǎng),促進(jìn)有益菌的生長(zhǎng),從而改善了腸道的健康度有密切關(guān)系。
4.寡糖在反芻動(dòng)物飼料中的應(yīng)用
肖宇等(2012)研究外源寡糖對(duì)奶山羊血清生化指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)的影響,結(jié)果表明:果寡糖可顯著降低血清丙二醛和低密度脂蛋白膽固醇含量,顯著提高血清中總蛋白和球蛋白含量;甘露寡糖可顯著降低血清丙二醛含量和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性,顯著提高血清中球蛋白和血清磷含量;說(shuō)明添加量為1%(以有效含量計(jì))FOS和MOS能在一定水平上提高奶山羊的抗氧化能力,改善機(jī)體脂質(zhì)代謝、蛋白質(zhì)合成。戈婷婷等(2012)采用體外批次培養(yǎng)法研究功能性寡糖對(duì)錦江黃牛瘤胃發(fā)酵及微生物生長(zhǎng)效率的影響,結(jié)果表明:MOS、FOS和大豆寡糖均顯著增加培養(yǎng)液揮發(fā)性脂肪酸和菌體蛋白濃度,當(dāng)MOS、FOS和大豆寡糖添加量在1.00%~1.20%時(shí),能最大效率的促進(jìn)瘤胃微生物的生長(zhǎng)。
(四)寡糖在農(nóng)牧業(yè)中的應(yīng)用前景
寡糖作為一種純天然的可再生資源,是人類(lèi)用之不竭的生物資源,其開(kāi)發(fā)與應(yīng)用具有深遠(yuǎn)的意義。例如,甲殼素(Chitin)主要存在于蝦、蟹及昆蟲(chóng)等甲殼類(lèi)動(dòng)物的外殼、真菌(酵母、霉菌,香菇等)、藻類(lèi)及高等植物的細(xì)胞壁中,生物合成量高達(dá)100億噸/年,僅海洋生物的合成量就達(dá)到了10億噸/年以上。因此,來(lái)源廣泛、天然、無(wú)毒無(wú)殘留、無(wú)毒副作用的功能性寡糖,是當(dāng)今國(guó)內(nèi)外結(jié)束抗生素時(shí)代,開(kāi)啟綠色安全促長(zhǎng)劑時(shí)代的熱點(diǎn)開(kāi)發(fā)領(lǐng)域,在農(nóng)牧業(yè)領(lǐng)域必將具有非常寬廣的應(yīng)用前景。